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毛細(xì)管電泳影響分離因素

更新時(shí)間:2019-10-22      點(diǎn)擊次數(shù):4313
   毛細(xì)管電泳影響分離因素
  1.緩沖液
  緩沖試劑的選擇主要由所需的pH決定,在相同的pH下,不同緩沖試劑的分離效果不盡相同,有的可能相差甚遠(yuǎn)。CE中常用的緩沖試劑有:磷酸鹽、硼砂或硼酸、醋酸鹽等。
  緩沖鹽的濃度直接影響到電泳介質(zhì)的離子強(qiáng)度,從而影響Zeta電勢(shì),而Zeta電勢(shì)的變化又會(huì)影響到電滲流。緩沖液濃度升高,離子強(qiáng)度增加,雙電層厚度減小,Zeta電勢(shì)降低,電滲流減小,樣品在毛細(xì)管中停留時(shí)間變長(zhǎng),有利于遷移時(shí)間短的組分的分離,分析效率提高。同時(shí),隨著電解液濃度的提高,電解液的電導(dǎo)將大大高于樣品溶液的電導(dǎo)而使樣品在毛細(xì)管柱上產(chǎn)生堆積的效果,增強(qiáng)樣品的富集現(xiàn)象,增加樣品的容量,從而提高分析靈敏度。但是,電解液濃度太高,電流增大,由于熱效應(yīng)而使樣品組分蜂形擴(kuò)展,分離效果反而變差。此外,離子還可以通過(guò)與管壁作用以及影響溶液的粘度、介電常數(shù)等來(lái)影響電滲,離子強(qiáng)度過(guò)高或過(guò)低都對(duì)提高分離效率不利。
  2.pH值
  緩沖體系pH的選擇依樣品的性質(zhì)和分離效率而定,是決定分離成敗的一大關(guān)鍵。不同樣品需要不同的pH分離條件,控制緩沖體系的pH值,一般只能改變電滲流的大小。pH能影響樣品的解離能力,樣品在極性強(qiáng)的介質(zhì)中離解度增大,電泳速度也隨之增大,從而影響分離選擇性和分離靈敏度。pH還會(huì)影響毛細(xì)管內(nèi)壁硅醇基的質(zhì)子化程度和溶質(zhì)的化學(xué)穩(wěn)定性,pH在4-10之間,硅醇基的解離度隨pH的升高而升高,電滲流也隨之升高。因此,pH為分離條件優(yōu)化時(shí)不可忽視的因素。毛細(xì)管
  3.分離電壓
  在CE中,分離電壓也是控制電滲的一個(gè)重要參數(shù)。高電壓是實(shí)現(xiàn)CE快速、的前提,電壓升高,樣品的遷移加大,分析時(shí)間縮短,但毛細(xì)管中焦耳熱增大,基線(xiàn)穩(wěn)定性降低,靈敏度降低;分離電壓越低,分離效果越好,分析時(shí)間延長(zhǎng),峰形變寬,導(dǎo)致分離效率降低。因此,相對(duì)較高的分離電壓會(huì)提高分離度和縮短分析時(shí)間,但電壓過(guò)高又會(huì)使譜帶變寬而降低分離效率。電解質(zhì)濃度相同時(shí),非水介質(zhì)中的電流值和焦耳熱均比水相介質(zhì)中小得多,因而在非水介質(zhì)中允許使用更高的分離電壓。
  4.溫度
  溫度影響分離重現(xiàn)性和分離效率,控制溫度可以調(diào)控電滲流的大小。溫度升高,緩沖液粘度降低,管壁硅輕基解離能力增強(qiáng),電滲速度變大,分析時(shí)間減短,分析效率提高。但溫度過(guò)高,會(huì)引起毛細(xì)管柱內(nèi)徑向溫差增大,焦耳熱效應(yīng)增強(qiáng),柱效降低,分離效率也會(huì)降低。
  5.添加劑
  在電解質(zhì)溶液中加入添加劑,例如中性鹽、兩性離子、表面活性劑以及有機(jī)溶劑等,會(huì)引起電滲流的顯著變化。表面活性劑常用作電滲流的改性劑,通過(guò)改變濃度來(lái)控制電滲流的大小和方向,但當(dāng)表面活性劑的濃度高于臨界膠束濃度時(shí),將形成膠束。加入有機(jī)溶劑會(huì)降低離子強(qiáng)度,Zeta電勢(shì)增大,溶液粘度降低,改變管壁內(nèi)表面電荷分布,使電滲流降低。在電泳分析中,緩沖液一般用水配制,但用水一有機(jī)混合溶劑常常能有效改善分離度或分離選擇性。毛細(xì)管電泳處理軟件界面。

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